PCRテクノロジーの原理と蛍光PCR法の包括的な説明

」となります。 PCR技術の原理

今年、COVID-19は世界中で激怒しており、誰もが核酸検査について聞いたことがあるに違いありません。エピデミックの核酸検出では、PCR蛍光技術が中心的な役割を果たし、検査官がCOVID-19に感染しているかどうかを迅速かつ正確に判断するのに役立ちます。

では、PCRテクノロジーとは正確には何ですか?

PCRは、ポリメラーゼ連鎖反応の頭字語である。要するに、PCRは3つの基本的な反応ステップで構成されています: 高温変性-低温アニーリング-中温拡張:

1.一本鎖になるDNAの変性

テンプレートDNAを一定時間約95 ℃ に加熱した後、テンプレートDNAの二本鎖は一本鎖に解離され、プライマーに結合して次の反応ラウンドの準備をすることができます。

2.低温アニーリング

テンプレートDNAが一本鎖に変性された後、温度は約55 °Cに下げられ、プライマーはテンプレートDNA一本鎖の相補配列と対になります。

3.ミディアム温度エクステンション

Taq酵素の作用下で、DNAテンプレートとプライマーコンジュゲートは反応原料としてdNTPを使用し、テンプレートとしてターゲット配列を使用します。塩基対形成と半予約複製の原理に従って、最後にテンプレートDNA鎖に相補的な新しい半予約複製鎖を合成します。

を参照してください。蛍光PCRの検出方法

現在、中国の国家医薬品局によって承認されたCOVID-19検出試薬のほとんどは、COVID-19を検出するために蛍光PCR法を使用しています。

蛍光PCR法とは、PCR反応系に蛍光基を付加することをいう。 PCR増幅の進行に伴い、反応生成物は蓄積し続け、蛍光シグナル強度も比例して増加します。蛍光増幅曲線グラフ、PCR蛍光プロセスのリアルタイム検出。

「」を参照してください。 PCR蛍光消耗品の選択の原則

1.材料

PCR/qPCR消耗品は通常試薬またはサンプルと直接接触しているため、PCRは一般にPP材料でできていますが、ポリプロピレン (PP) 材料は生物学的に不活性な材料です。表面は生体分子に付着しにくく、耐薬品性と温度が良好です。公差 (121 °Cでオートクレーブでき、サーマルサイクリング中の温度変化にも耐えることができます)。 PCRの消耗品はすべてPP材料です。

2. PCRチューブ/プレートボリューム

異なるボリュームのPCRチューブ/プレートを選択する方法は?

選択目的: 特定の実験要件に従って適切な製品を選択します。 PCRチューブの容量は、PCR反応の要件をほぼ満たすことができる。 PCRチューブは、低〜中程度のスループットPCR/qPCR実験に理想的であり、単一のチューブとストリップが2つの最も一般的に使用されるフォーマットです。

単一のチューブは、実行する反応の正確な数を設定する柔軟性を提供します。あるいは、より大きな反応量のために単一の0.5mLチューブを選択することができる。

カップリングは通常、別々のまたはキャップ付きの8または12チューブ形式で利用できます。低スループットおよび中スループット実験用のシングルチャネルおよびマルチチャネルピペットに対応。キャップ付きストリップは、サンプルの汚染を防ぐために、サンプルチューブを独立して開閉します。

3.壁の厚さ

チューブの壁の厚さは熱伝導率に直接影響し、非常に薄い壁の厚さは熱伝達を最適化し、サイクルタイムを短縮します。超薄壁のプラスチックは、標準バージョンよりも約50% 薄く、熱バリアをさらに低減し、より高速で堅牢な応答を実現します。 PCR消耗品はすべて超薄型チューブ壁です。

4.カラー

PCRプレートは、特にハイスループット実験で、サンプルの視覚的分化と同定を容易にするために、さまざまな異なる色の形式で利用できることがよくあります。通常のPCR反応では、透明または着色されたPCRチューブを使用することができ、透明なPCRチューブはサンプル分類管理により役立ちます。

プラスチックの色はDNA増幅に影響を与えませんが、qPCRには高品質の白色PCR消耗品が推奨されます。 QPCRは蛍光シグナル強度のリアルタイム定量的検出を必要とするので、高感度で正確な蛍光シグナル伝達が必要とされる。実験は、従来の透明なPCR製品と比較して、白色PCR製品が蛍光シグナルを最大限に反映し、宇宙シグナルの相互汚染を減らすことができることを示しました。そしてリアルタイム蛍光定量的PCRの結果を得る。

蛍光検出器の位置デザインが異なるため、さまざまなブランドの機器は、メーカーが推奨する材料を参照してください。 Bio-Rad CFXまたはRoche 480リアルタイムPCR機器の場合、製造業者は白いPCRプレートの使用を推奨しています。 PCRプレートは白色または透明であり、様々な仕様を有するので、市場に出回っている一般的なPCR機器に適している。