臨床完全自動ELISAの一般的なモード

抗原と抗体の決定の違いに応じて、直接法、間接法、二重抗体サンドイッチ法 (直接、間接) など、多くの自動ELISA測定モードがあります。競合阻害法 (直接、サンドイッチなど) 、キャプチャ法など。臨床検査室では、 一般的に使用されるELISA測定モードには、二重抗体サンドイッチ法、間接法、二重抗原サンドイッチ法、競合阻害法、および捕捉法が含まれます。

抗原の決定において、タンパク質高分子抗原の決定のために最も一般的に使用されるモードは、二重抗体サンドイッチ法である。 単一のエピトープのみを持つ小分子の場合、競合的阻害法が使用されます。抗体決定は通常、間接法、二重抗原サンドイッチ法、競合的阻害法、および捕捉法を使用します。

1.ELISAワークステーションの二重抗体サンドイッチ方法

複数のエピトープを含む高分子タンパク質の場合、ELISAワークステーション二重抗体サンドイッチ法を使用して、それを決定するのは非常に簡単です。 タンパク質抗原を測定するための既存の市販キットは、基本的にすべてこの測定モードを採用しています。

抗原の二重抗体サンドイッチ検出のための最初の全自動ELISAキットはすべて「2ステップ法」を採用しました。 その後、検出時間を短縮し、操作手順を簡素化するために、試薬メーカーは徐々に「ワンステップ」を導入しました医学テストキットをご利用ください。

現在、私たちの臨床研究所では、HBsAg、 α-フェトプロテイン (α-フェトプロテイン、 α FP) 、前立腺特異抗原 (PSA) 、CAシリーズマーカーなどの高分子抗原の決定、hCGやホルモンなどは基本的にワンステップ方式を使用します。 2ステップ法と比較して、1ステップ法は操作が簡単ですが、固有の欠点があります。 それがうまく処理されない場合、二重抗体サンドイッチイムノアッセイの結果は、フック効果の存在のために偽陰性または低い定量的結果になります。

2.ELISAワークステーションの競争法テスト

ジゴキシン、テオフィリンなどの小分子ハプテン、およびT3、T4、およびテストステロンなどの他の薬物およびホルモンは、1つのエピトープしか有していない可能性がある。 または、分子が小さすぎるため、ある抗体に結合した後、立体障害のために別の抗体に結合できないため、二重抗体サンドイッチ法を測定に使用することはできません。 ELISAワークステーションは、競合阻害法のみを使用できます。

このアッセイモードでは、小分子と酵素の組み合わせを得る必要がある。 小分子酵素コンジュゲートの製造は、抗体酵素コンジュゲートの製造ほど単純ではなく、その精製も非常に困難です。 小分子結合酵素と遊離酵素の分子量差は小さく、一般的な分子ふるい法を用いて分離することは困難である。 したがって、一部の人々は、二重抗体サンドイッチ競争ELISA法を確立しようとしますジ-またはマルチマー小分子の合成に基づく小分子の決定のために。 決定の感度と特異性が改善されました。

3.ELISAワークステーションにおける抗体決定の間接的な方法

感染症の病原体抗原に対して体によって生成された抗体を測定し、同じことが抗体テストキットをご利用ください。 高純度で明確な抗原を入手することが困難になる前、または抗原がより複雑な場合は、一般的に間接的な方法が使用されます。

今日、C型肝炎ウイルス抗体 (抗HCV) の一般的に使用されている臨床試験項目はすべて間接的な方法であり、間接的な方法は抗体を検出するために使用されています。 厳密に言えば、抗体のIgGクラスのみが測定され、IgMおよびIgAクラスは関与しない。 これは、酵素標識二次抗体によって決定される。 現在、いくつかの特定のI g β 抗体検出キットは間接法を採用しています。

4.ELISAワークステーションの二重抗原サンドイッチ方法

二重抗原サンドイッチ法によって測定された抗体は、すべてのタイプの特異的抗体を含み、非特異的IgGによって干渉されない。 したがって、抗体を検出するための二重抗原サンドイッチ法の感度と特異性は、間接法よりも高くなります。 現在、抗体決定の感度を向上させるために、ELISAワークステーションのキットは基本的に二重抗原サンドイッチ法を採用しており、ただし、抗HCVはその抗原のためにより複雑である。

5.ELISAワークステーションの競争法

抗体の決定は、一般に、競合法を使用しない。 抗原中の不純物を除去するのが難しい場合、または抗原の結合特異性が不安定な場合、ELISAワークステーションはこのモードを使用して抗体を決定できます。 最も典型的な例は、B型肝炎ウイルスコア抗体 (HBcAb) およびB型肝炎ウイルスe抗体 (HBeAb) の決定である。