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抗原と抗体の判定の差によっては、直接法、间接法、二重抗体サンドイッチ法 (直接、间接) 、竞争阻害法 (直接、サンドイッチなど) 、捕捉法など、多くの自动ELISA测定モードがある。 一般的に使用されるELISA測定モードには、二重抗体サンドイッチ法、間接法、二重抗原サンドイッチ法、競合阻害法、および捕捉法が含まれます。

抗原の決定において、タンパク質高分子抗原の決定のために最も一般的に使用されるモードは、二重抗体サンドイッチ法である。 単一のエピトープのみを持つ小分子の場合、競合的阻害法が使用されます。抗体決定は通常、間接法、二重抗原サンドイッチ法、競合的阻害法、および捕捉法を使用します。

1.ELISAワークステーションの二重抗体サンドイッチ方法

For macromolecular proteins containing multiple epitopes, the ELISAワークステーション uses the double antibody sandwich method to determine it is quite simple. The existing commercial kits for measuring protein antigens basically all adopt this measuring mode.

The first full-automatic ELISA kits for double-antibody sandwich detection of antigens all adopted the "two-step method." Later, in order to shorten the detection time and simplify the operation steps, reagent manufacturers gradually introduced the "one-step" 医学テストキット.

現在、私たちの臨床研究所では、HBsAg、 α-フェトプロテイン (α-フェトプロテイン、 α FP) 、前立腺特異抗原 (PSA) 、CAシリーズマーカー、hCG、ホルモンなどの高分子抗原の決定は基本的にワンステップ法を使用しています。 2ステップ法と比較して、1ステップ法は操作が簡単ですが、固有の欠点があります。 それがうまく処理されない場合、二重抗体サンドイッチイムノアッセイの結果は、フック効果の存在のために偽陰性または低い定量的結果になります。

2.ELISAワークステーションの競争法テスト

Small molecule haptens such as digoxin, theophylline and other drugs and hormones such as T3, T4, and testosterone may have only one epitope. Or because the molecule is too small, after binding to one antibody, it cannot bind to another antibody due to steric hindrance, so the double-antibody sandwich method cannot be used for measurement. The ELISAワークステーション can only use the competitive inhibition method.

このアッセイモードでは、小分子と酵素の組み合わせを得る必要がある。 小分子酵素コンジュゲートの製造は、抗体酵素コンジュゲートの製造ほど単純ではなく、その精製も非常に困難です。 小分子結合酵素と遊離酵素の分子量差は小さく、一般的な分子ふるい法を用いて分離することは困難である。 したがって、一部の人々は、二重抗体サンドイッチ競争ELISA法を確立しようとします二重抗体またはマルチマー小分子の合成に基づく小分子の決定のために。 決定の感度と特異性が改善されました。

3.ELISAワークステーションにおける抗体決定の間接的な方法

Measure the antibodies produced by the body against pathogen antigens of infectious diseases, and the same is true for the 抗体テストキットを使用します。 高純度で明確な抗原を入手することが困難になる前、または抗原がより複雑な場合は、一般的に間接的な方法が使用されます。

今日、C型肝炎ウイルス抗体 (抗HCV) の一般的に使用されている臨床試験項目はすべて間接的な方法であり、間接的な方法は抗体を検出するために使用されています。 厳密に言えば、抗体のIgGクラスのみが測定され、IgMおよびIgAクラスは関与しない。 これは、酵素標識二次抗体によって決定される。 現在、いくつかの特定のIgα 抗体検出キットは間接法を採用しています。

4.ELISAワークステーションの二重抗原サンドイッチ方法

The antibodies measured by the double antigen sandwich method include all types of specific antibodies, and are not interfered by non-specific IgG. Therefore, the sensitivity and specificity of the double antigen sandwich method to detect antibodies are higher than the indirect method. At present, in order to improve the sensitivity of antibody determination, the kit of the ELISAワークステーション has basically adopted the double-antigen sandwich method, except that anti-HCV is more complicated due to its antigen.

5.ELISAワークステーションの競争法

The determination of antibodies generally does not use a competition method. When the impurities in the antigen are difficult to remove or the binding specificity of the antigen is unstable, the ELISAワークステーション can use this mode to determine antibodies. The most typical example is the determination of hepatitis B virus core antibody (HBcAb) and hepatitis B virus e antibody (HBeAb).